1）将为1。
将5 ml培养物倒入微量离心管中，以12,000 g离心30秒，然后抽吸培养物以尽可能干燥细菌。[重悬1 ml冰冷的STE溶液并离心。以6000 rpm的速度去除上清液2分钟。该步骤是去除杂质，例如培养基和残留在细菌表面上的残留物，并使随后的反应干扰最小化。加冰5分钟；[在混合过程中避免气泡的方法是将黄色喷枪的压力从200 ul调整到约50 ul。太高是产生气体的主要原因。]3.在步骤2中添加200μl新鲜制备的溶液II，II。解决方案二：0
用2 mol / l NaOH + 1％SDS（目前可用）[200μl2 M NaOH + 200μl10％SDS = 2 ml溶液II]覆盖管，并迅速[尽快摇匀]。颠倒5次以混合内容物。请勿摇晃，将离心管放在冰上；[直接从离心管底部添加喷枪的黄色头，如果它缓慢上升，则添加II。混合开始并提高效力]4.添加150μl预冷的溶液III冰，盖上管并轻轻颠倒10秒钟，以使溶液III在粘性细菌裂解液上均匀分布[[添加至II][将EP管压扁并旋转几次以进行混合后，将其倒入3-5 m冰中。以12000g离心5分钟（最好10分钟）。另一个离心管[针吸黄色，缓慢吸，不要摇动下层][吸上清液，然后离心5分钟，效果更好]6.加入等量的苯酚：氯仿：异戊醇，搅拌混合时，将上清液转移到另一个离心管中1分钟。[添加和转移在通风的厨房中进行，要戴上手套，还要戴上手套。？或氯仿（如果离心）。
枪头又用了一个。
将5毫升EP管放入特殊的垃圾袋中，密封垃圾袋，然后将其放入特殊的垃圾桶中。
]7.用2倍体积的乙醇沉淀双链DNA，混合并在4度下放置30分钟[可见的絮凝剂]8.在12000 g下离心5分钟，小心吸出上清液然后，将试管放在纸巾上（或使用一次性吸头连接至真空管并轻轻抽动），并去除试管壁上的任何液滴。是的（将核酸在空气中干燥10分钟）；[先用蓝色的枪吸，然后用黄色的枪吸，最后用白色的枪吸。
在低速行驶的情况下，它可以放置在超干净工作台的挡风玻璃的出风口处，并且吹气速度更快。
如果不能长时间干燥，则可以在50度烤箱中烘烤5分钟]9。
管壁和沉淀物用200ul乙醇洗涤，该乙醇用70％冰预冷。DNA不溶于70％乙醇。30％的水的目的是溶解盐并避免干扰随后的酶消化或其他操作。[反复抽吸，先抽吸管壁，然后轻轻溶胀沉淀物使其均匀悬浮。有点，但关系不大]；以12000 rpm的转速离心4度5分钟；使用黄色的枪头吸出上清液，然后立即离心30秒，然后使用白色的枪头使用抽吸剩余的溶液。在工作台上喷涂30分钟。存放在-20度或4度。
[加水之前，用纸擦干管壁上的干酒精。加水时，请注意不要滚动未喷洒的乙醇。首先，将1000X Rnase母液加入水中，并在37°下放置1小时以消化RNA]
